Як вибрати темнопольний мікроскоп для гемосканирования (дослідження живої краплі крові або МНК)?
Метод темнопольної мікроскопії широко застосовується в області дослідження біологічних зразків (бактерій, крові тощо). Цей принцип виявляється вкрай корисним при спостереженні прозорих нефарбованих і неабсорбирующих об'єктів, які не вдається побачити при освітленні методом світлого поля. В результаті освітлення методом темного поля можна спостерігати яркосветящиеся на темному, практично чорному, тлі мікроорганізми, що дозволяє найкращим чином виявити особливості контуру спостережуваних часток, але не дає можливості дослідити його внутрішню структуру.
Технічно такий результат досягається за рахунок використання спеціального конденсора темного поля, особливістю якого є перекрита (затемнена) центральна частина. Таким чином, висвітлення досліджуваного під мікроскопом препарату здійснюється порожнистим світловим конусом, а світло, що пройшов без заломлення, просто не потрапить в об'єктив, так як його вхідне вічко опиниться в області геометричної тіні. У підсумку, видиме в мікроскопі зображення формується лише невеликою частиною променів - розсіяним мікрочастинками світлом за рахунок неоднорідностей зразка.
Як правило, лабораторні мікроскопи в базовій комплектації не призначені для проведення досліджень методом темного поля. У даній статті ми пропонуємо Вам детальну інформацію, як з светлопольного мікроскопа отримати темнопольний, особливості методу і його області застосування.
Темнопольний мікроскоп для гемосканирования. Дослідження живої краплі крові або мікроскопія нативної крові (МНК)
Сьогодні багато використовують темнопольний мікроскоп для гемосканирования або дослідження «живий» краплі крові (live blood analysis), також зустрічається термін - мікроскопія нативної крові (МНК). Даний метод відноситься до галузі альтернативної медицини, так як не має наукового підтвердження і не визнається традиційною медициною. Тим не менш, гемосканірованіе стало досить популярним методом функціональної діагностики в сучасному світі. Багато, хто практикують дослідження живої краплі крові або МНК також проводять і спостереження, у світлому полі, але, як правило, вважають за краще обладнати лабораторію темнопольним мікроскопом, також доукомплектувавши його спеціальною цифровою камерою для виводу зображення на ПК, що дозволить демонструвати пацієнту результати проведеного дослідження
Темнопольний мікроскоп в традиційній медицині
Однією з головних областей застосування метод темнопольної мікроскопії в традиційній медицині є діагностика сифілісу на ранній стадії. Темнопольний мікроскоп дозволяє виявити спірохети в умовах їх природного існування. Крім того, даний метод мікроскопії також широко використовується для дослідження грибів, бактерій та ін. живих мікроорганізмів.
Конденсор темного поля
Щоб світле лабораторний мікроскоп «перетворити» в темнопольний мікроскоп, необхідно встановити спеціальний конденсор темного поля разом стандартного светлопольного конденсора Аббе. Звернемо увагу, що не всі моделі лабораторних мікроскопів мають можливість «безболісної» зміни конденсора. Крім того, перш ніж купити конденсор темного поля, необхідно переконатися, що він підходить для Вашого мікроскопа. Тобто конденсори відрізняються по своїй конструкції, зокрема висоті, кріпленню і т. п., з-за чого вони не є універсальними. Як правило, виробник пропонує конкретний конденсор для конкретної моделі або серії мікроскопів.
Крім того, слід враховувати ще одну таку важливу особливість конденсорів, як числова апертура. Так конденсори класифікуються на олійні (з числовою апертурою вище 1) і сухі (з числовою апертурою менше 1). При проведенні досліджень важливо, щоб числова апертура конденсора була вище числової апертури об'єктива. Звідси випливає, що якщо Ваші дослідження передбачають проведення спостережень при 100х иммерсионном об'єктиві, то Вам необхідно вибрати масляний конденсор з числовою апертурою 1.25 і вище, а також використовувати спеціальний 100х іммерсійне об'єктив з вбудованою ірисовою діафрагмою. Звичайно, масляні конденсори і коштують на порядок дорожче. Якщо дослідження будуть проводитися при використанні сухих об'єктивів з меншими збільшеннями (наприклад, 20х, 40х), то Вам цілком підійде і сухий конденсор.
Крім того, не забудьте, що після установки конденсора темного поля його необхідно центрувати належним чином. Тому рекомендується вибирати мікроскоп з передбаченими спеціальними юстирувальними гвинтами, причому, бажано, не втоплені всередину оправи-держателя конденсора, а винесеними назовні. Також додаткову перевагу забезпечить мікроскоп з принципом освітлення по Келлеру, що дозволить найкращим чином налаштувати освітлення препарату
Джерело освітлення
Крім усього іншого, варто звертати увагу і на потужність лампи підсвічування мікроскопа. Вся справа в тому, що за умови слабкого освітлення Вам не вдасться домогтися картинки належної якості. Якщо освітлення буде трохи недостатнім при светлопольной мікроскопії, то для реалізації методу темного поля його Вам буде не вистачати вже й поготів. Тим більше, якщо Ви плануєте ще й приєднувати камеру для виведення зображення на ПК.
Що ж стосується вибору світлодіодним або галогенової лампи в якості джерела освітлення, то нагадаємо, що світлодіодне освітлення забезпечує правильну передачу кольору, на відміну від галогенового, в результаті якого будуть переважати теплі тони. У той час як на сьогоднішній день світлодіодні освітлювачі не поступаються, а іноді і перевершують по яскравості галогенові.
Демонстрація спостережуваного зображення на ПК.
Щоб вивести зображення на екран ПК, Вам знадобитися доукомплектувати свій мікроскоп спеціальною цифровою камерою. В залежності від того, який оснащений насадкою мікроскоп, ми отримуємо різні способи установки камери:
- У разі моно - або бінокулярної насадки цифрова камера встановлюється замість окуляра
- В мікроскопах з тринокулярной насадкою передбачено окремий вихід для кріплення камери
До речі, зверніть увагу, що ще тут може виявитися корисним наявність важеля розподілу світла в мікроскопах, оснащених тринокулярными головками, що дозволить Вам при необхідності по максимуму направити світло саме на фототубус.
Особливість методу темнопольної мікроскопії накладає певні вимоги до вибору цифрової камери. По-перше, чутливість. Вибирайте камеру з надзвичайною чутливістю матриці, в іншому випадку, фото - та відеозйомка можуть виявитися марними. По-друге, у разі, якщо Ви використовуєте темнопольний мікроскоп для гемосканирования або дослідження «живий» краплі крові, це передбачає спостереження ще живих еритроцитів, які в даних умовах мають властивість дуже швидко «бігати». Тому слід звертати увагу і на такий параметр, як максимальна частота кадрів. Чим ближче вона до 25к/сек, тим краще. Але, крім того, частота кадрів камери залежить від багатьох параметрів, тому вибір камери для темнопольної мікроскопії досить відповідальна і не просте завдання.
Висновок
Підводячи підсумки, можемо виділити наступні важливі пункти при виборі темнопольного мікроскопа для гемосканирования (дослідження живої краплі крові або мікроскопії нативної крові):
- Конструкцією біологічного мікроскопа повинна бути передбачена можливість зміни светлопольного конденсора Аббе на поле.
- Переважно, щоб освітлення мікроскопа регулювали за принципом Келлера.
- Необхідно доукомплектувати мікроскоп конденсор темного поля, при цьому звертаючи увагу на його тип (масляний або сухий). Так для проведення спостережень у высокоапертурные об'єктиви обов'язково необхідно вибирати саме масляний конденсор, причому також можуть знадобитися і спеціальні об'єктиви для темного поля з вбудованою ірисовою діафрагмою
- Зверніть увагу на потужність підсвічування мікроскопа.
- Вибраний мікроскоп може мати будь-який тип насадки: моно-, біно - або тринокулярную. Однак, пам'ятайте, що бінокулярна насадка виявиться більш комфортною за умови тривалих спостережень, а якщо планується приєднання цифрової камери до мікроскопу, то краще буде тринокулярна модель, що має окремий вихід для камери.
- При виборі тринокулярного мікроскопа моделі з важелем для розподілу світла будуть мати деяку перевагу.
- Якщо необхідно приєднати цифрову камеру для мікроскопа, звертайте увагу на такі параметри як чутливість і частота кадрів.
Приклади зображень зразків, спостережуваних в темному полі:
![]() | Зразок - цвілевий гриб пеницилл. Спостереження в темному полі під мікроскопом Konus Infinty-3 |
![]() | Зразок - цвіль. Спостереження в темному полі під мікроскопом Bresser TRM-301 |
Автор статті: Галина Цехмістро
Рекомендуємо
Будь ласка, зареєструйстеся
Залишайте коментарі - вони важливі для покупців.