Как выбрать темнопольный микроскоп для гемосканирования (исследования "живой" капли крови или МНК)?

Метод темнопольной микроскопии широко применяется в области исследования биологических образцов (бактерий, крови и т.п.). Данный принцип оказывается крайне полезным при наблюдении прозрачных неокрашенных и неабсорбирующих объектов, которые не удается увидеть при освещении методом светлого поля. В результате освещения методом темного поля можно наблюдать яркосветящиеся на темном, практически черном, фоне микроорганизмы, что позволяет наилучшим образом выявить особенности контура наблюдаемых частиц, но не дает возможности исследовать его внутреннюю структуру.

Технически подобный результат достигается за счет использования специального конденсора темного поля, особенностью которого является перекрытая (затемненная) центральная часть. Таким образом, освещение исследуемого под микроскопом препарата осуществляется полым световым конусом, а свет, прошедший без преломления, просто не попадет в объектив, так как его входной зрачок окажется в области геометрической тени. В итоге, видимое в микроскопе изображение формируется лишь небольшой частью лучей - рассеянным микрочастицами светом за счет неоднородностей образца.

Как правило, лабораторные микроскопы в базовой комплектации не предназначены для проведения исследований методом темного поля. В данной статье мы предлагаем Вам подробную информацию, как из светлопольного микроскопа получить темнопольный, особенности метода и его области применения.

Темнопольный микроскоп для гемосканирования. Исследование «живой» капли крови или микроскопия нативной крови (МНК)

Сегодня многие используют темнопольный микроскоп для гемосканирования или исследования «живой» капли крови (live blood analysis), также встречается термин - микроскопия нативной крови (МНК). Данный метод относится к области альтернативной медицины, так как не имеет научного подтверждения и не признается традиционной медициной. Тем не менее, гемосканирование стало достаточно популярным методом функциональной диагностики в современном мире. Многие, кто практикуют исследование «живой» капли крови или МНК также проводят и наблюдения в светлом поле, но, как правило, предпочитают оборудовать лабораторию темнопольным микроскопом, также доукомплектовав его специальной цифровой камерой для вывода изображения на ПК, что позволит демонстрировать пациенту результаты проведенного исследования

Темнопольный микроскоп в традиционной медицине

Одной из главных областей применения метод темнопольной микроскопии в традиционной медицине является диагностика сифилиса на ранней стадии. Темнопольный микроскоп позволяет обнаружить спирохеты в условиях их естественного существования. Кроме того, данный метод микроскопии также широко используется для исследования грибов, бактерий и пр. живых микроорганизмов.

Конденсор темного поля

Чтобы светлопольный лабораторный микроскоп «превратить» в темнопольный микроскоп, необходимо установить специальный конденсор темного поля вместе стандартного светлопольного конденсора Аббе. Обратим внимание, что не все модели лабораторных микроскопов имеют возможность «безболезненной» смены конденсора. Кроме того, прежде чем купить конденсор темного поля, необходимо убедиться, что он подходит для Вашего микроскопа. Т.е. конденсоры отличаются по своей конструкции, в частности высоте, креплению и т.п., из-за чего они не являются универсальными. Как правило, производитель предлагает конкретный конденсор для конкретной модели или серии микроскопов.

Кроме того, следует учитывать еще одну такую важную особенность конденсоров, как числовая апертура. Так конденсоры классифицируются на масляные (с числовой апертурой выше 1) и сухие (с числовой апертурой меньше 1). При проведении исследований важно, чтобы числовая апертура конденсора была выше числовой апертуры объектива. Отсюда следует, что если Ваши исследования предполагают проведения наблюдений при 100х иммерсионном объективе, то Вам необходимо выбрать масляный конденсор с числовой апертурой 1.25 и выше, а также использовать специальный 100х иммерсионный объектив со встроенной ирисовой диафрагмой. Конечно, масляные конденсоры и стоят на порядок дороже. Если исследования будут проводиться при использовании сухих объективов с меньшими увеличениями (например, 20х, 40х), то Вам вполне подойдет и сухой конденсор.

Кроме того, не забудьте, что после установки конденсора темного поля его необходимо центрировать должным образом. Поэтому рекомендуется выбирать микроскоп с предусмотренными специальными юстировочными винтами, причем, желательно, не утопленными внутрь оправы-держателя конденсора, а вынесенными наружу. Также дополнительное преимущество обеспечит микроскоп с принципом освещения по Келлеру, что позволит наилучшим образом настроить освещение препарата

Источник освещения

Помимо всего прочего, стоит обращать внимание и на мощность лампы подсветки микроскопа. Все дело в том, что при условии слабого освещения Вам не удастся добиться картинки должного качества. Если освещение будет немного недостаточным при светлопольной микроскопии, то для реализации метода темного поля его Вам будет не хватать уж и подавно. Тем более, если Вы планируете еще и присоединять камеру для вывода изображения на ПК.

Что же касается выбора светодиодной или галогеновой лампы в качестве источника освещения, то напомним, что светодиодное освещение обеспечивает более правильную цветопередачу, в отличие от галогенового, в результате которого будут преобладать теплые тона. В то время как на сегодняшний день светодиодные осветители не уступают, а иногда и превосходят по яркости галогеновые.

Демонстрация наблюдаемого изображения на ПК.

Чтобы вывести изображения на экран ПК, Вам понадобиться доукомплектовать свой микроскоп специальной цифровой камерой. В зависимости от того, какой насадкой оснащен микроскоп, мы получаем разные способы установки камеры:

• В случае моно- или бинокулярной насадки цифровая камера устанавливается вместо окуляра
• В микроскопах с тринокулярной насадкой предусмотрен отдельный выход для крепления камеры

Кстати, обратите внимание, что еще здесь может оказаться полезным наличие рычага распределения света в микроскопах, оснащенных тринокулярными головками, что позволит Вам при необходимости по максимуму направить свет именно на фототубус.

Особенность метода темнопольной микроскопии накладывает определенные требования к выбору цифровой камеры. Во-первых, чувствительность. Выбирайте камеру с наилучшей чувствительностью матрицы, в противном случае, фото- и видеосъемка могут оказаться безуспешными. Во-вторых, в случае, если Вы используете темнопольный микроскоп для гемосканирования или исследования «живой» капли крови, это подразумевает наблюдение еще живых эритроцитов, которые в данных условиях имеют свойство очень быстро «бегать». Поэтому следует обращать внимание и на такой параметр, как максимальная частота кадров. Чем ближе она к 25к/сек, тем лучше. Но, кроме того, частота кадров камеры зависит от многих установленных параметров, поэтому выбор камеры для темнопольной микроскопии достаточно ответственная и не простая задача.

Вывод

Подводя итоги, можем выделить следующие важные пункты при выборе темнопольного микроскопа для гемосканирования (исследования "живой" капли крови или микроскопии нативной крови):

1. Конструкцией биологического микроскопа должна быть предусмотрена возможность смены светлопольного конденсора Аббе на темнопольный.
2. Предпочтительно, чтобы освещение микроскопа настраивалось по принципу Келлера.
3. Необходимо доукомплектовать микроскоп конденсором темного поля, при этом обращая внимание на его тип (масляный или сухой). Так для проведения наблюдений в высокоапертурные объективы обязательно необходимо выбирать именно масляный конденсор, причем также могут понадобиться и специальные объективы для темного поля со встроенной ирисовой диафрагмой
4. Обратите внимание на мощность подсветки микроскопа.
5. Выбранный микроскоп может иметь любой тип насадки: моно-, бино- или тринокулярную. Однако, помните, что бинокулярная насадка окажется более комфортной при условии длительных наблюдений, а если планируется присоединение цифровой камеры к микроскопу, то предпочтительнее будет тринокулярная модель, имеющая отдельный выход для камеры.
6. При выборе тринокулярного микроскопа модели с рычагом для распределения света будут иметь некоторое преимущество.
7. Если необходимо присоединить цифровую камеру для микроскопа, обращайте внимание на такие параметры как чувствительность и частота кадров.

​Примеры изображений образцов, наблюдаемых в темном поле:

	Образец - плесневой гриб пеницилл. Наблюдение в темном поле под микроскопом Konus Infinty-3
	Образец - плесень. Наблюдение в темном поле под микроскопом Bresser TRM-301

Автор статьи: Галина Цехмистро