Мікроскоп Bresser Science TRM-301 40x-1000x Phase Contrast

Огляд фазово-контрастного мікроскопа Bresser Science TRM-301 40x-1000x Phase Contrast

Біологічний мікроскоп Bresser Science TRM-301 40x-1000x Phase Contrast постав перед нами як надійний лабораторний мікроскоп для дослідницької роботи не тільки в світлому полі, але і проведення досліджень методом фазово-контрастної мікроскопії. Реалізувати обидва методу вдається завдяки розширеній комплектації приладу. До речі, при необхідності мікроскоп опціонально може бути дооснащен і спеціальним конденсор темного поля для роботи в темному полі.

Отже, мікроскоп Bresser Science TRM-301 40x-1000x Phase Contrast являє собою базову модель Bresser Science TRM-301 40x-1000x, додатково укомплектовані спеціальним фазово-контрастним набором Bresser Phase Contrast Set.

Тринокулярный біологічний мікроскоп з планахроматической оптикою і освітленням за принципом Келлера – чудовий вибір для сучасної лабораторії. Докладний огляд базової моделі мікроскопа Bresser Science TRM-301 40x-1000x ми робили раніше, і ознайомитися з ним можна тут.

А в цій статті давайте більш детально вивчимо йде в комплекті фазово-контрастний набір, що включає в себе:

• 4 ахроматичних фазово-контрастного об'єктива, розрахованих на стандартну довжину тубуса 160 мм, з маркуванням:
  • 10х/0.25 PHP 160/-
  • 20x/0.4 PHP 160/0.17
  • 40x/0.65 PHP 160/0.17
  • 100x/1.25 Oil PHP 160/0.17
• Фазово-контрастний конденсор з числовою апертурою N. A.=1.25 з ірисовою апертурної діафрагми і поворотним фільтротримачем
• Три кольорових світлофільтру (жовтий, зелений, блакитний) діаметром 32мм
• Флакон кедрового иммерсионного олії з коефіцієнтом заломлення n=1.515
• Юстировочный окуляр-телескоп
• Додатковий адаптер

Переваги застосування фазово-контрастної мікроскопії

Найважливішим достоїнством методу фазово-контрастної мікроскопії є унікальна можливість досліджувати біологічні зразки, живі клітини культури, тканини і мікроорганізми в їх природному стані, не піддаючи препарати штучному фарбуванню, зв'язування або іншого впливу. Метод фазового контрасту дозволяє візуалізувати динаміку відбуваються в живій клітині біологічних процесів з високим контрастом і роздільною здатністю, завдяки чому вдається виявити найдрібніші елементи, мікроскопічні внутрішні структурні деталі зразків. Широко застосовується в біологічних і медичних досліджень, зокрема цитології та гістології для вивчення безбарвних прозорих і напівпрозорих препаратів.

Фазово-контрастний мікроскоп

Отже, для «апгрейда» светлопольного мікроскопа до фазово-контрастної, звичайні светлопольные об'єктиви в револьверної голівці мікроскопа слід замінити на спеціальні фазово-контрастні, у задній фокальній площині яких (або біля неї) вміщена спеціальна фазова пластина. До речі, розрізняють позитивні і негативні фазові пластини для реалізації позитивного та негативного фазового контрасту. В даному випадку ми маємо справу з позитивною фазової пластиною. Такі об'єктиви формують темне зображення на світло-сірому тлі.

Фазово-контрастні об'єктиви

Ахроматичні об'єктиви, розраховані на стандартну довжину тубуса 160 мм. 10х об'єктив допускає роботу з покривними стеклами будь-якої товщини, а 20х, 40х і 100х – з покривним склом завтовшки 0.17 мм

• Робоча відстань об'єктива 10х становить 6.6 мм
• Робоча відстань об'єктива 20х становить 1,85 мм
• Робоча відстань об'єктива 40х становить 0.64 мм
• Робоча відстань об'єктива 100х становить 0.19 мм

Зважаючи маленького робочого відстані (менше 1мм) потужних 40-кратного і 100-кратного об'єктивів, щоб уникнути ризику випадкового пошкодження зразка або лінз об'єктивів вони мають підпружинену конструкцію. 10х, 20х і 40х об'єктиви сухі, а 100х об'єктив – іммерсійне, тобто вимагає нанесення краплі иммерсионного масла між препаратом і передньою лінзою об'єктива. Нагадаємо, що иммерсионное масло в мікроскопії застосовується для підвищення числової апертури об'єктива за рахунок зменшення втрат світла при відбитті і відображенні. По закінченні роботи з мікроскопом плівку иммерсионного масла слід прибрати з лінзи об'єктива чистою і сухою серветкою або фланелевою тканиною, а з препарату – серветкою, змоченою в розчиннику (ксилолі або бензині).

На лінзи об'єктивів нанесено якісне багатошарове покриття. Якщо заглянути в об'єктиви, можна легко побачити фазове кільце. Зі свого боку хочеться додати, що було б краще, якби виробник укомплектував мікроскоп планахроматическими фазово-контрастною об'єктивами. Як відомо, недоліком фазово-контрастної мікроскопії є поява артефактів, ореоли навколо деталей препаратів і ефекту переходу контрасту, коли спостерігається інтенсивність не відповідає оптичної різниці ходу (значенням показника заломлення та товщини) між досліджуваним препаратом і навколишнім середовищем. Тому раціонально використовувати як можна більш якісну оптику.

Фазово-контрастний конденсор

Наступним кроком необхідно замінити світле конденсор Аббе на спеціальний фазово-контрастний, оснащений спеціальними кільцевими діафрагмами в його передній фокальній площині, відповідними по діаметру і оптично пов'язаними з внутрішньої фазової платівкою, розміщеній в задню фокальну площину об'єктива. Для цього слід послабити юстувальні і притискні гвинти в оправі-тримачі конденсора, акуратно вийняти конденсор Аббе, після чого встановити фазово-контрастний і зафіксувати його за допомогою відповідних гвинтів. Природно, після установки конденсор слід отъюстировать, добившись за допомогою юстіровочних гвинтів рівномірного освітлення поля зору (для налаштування використовується 10х об'єктив, кільцева діафрагма конденсора встановлена в положення 0). Далі, щоб приступити до спостережень препарату методом фазово-контрастної мікроскопії необхідно виконати наступні кроки:

• Виберіть об'єктив для проведення спостережень
• Поверніть кільцеву діафрагму (диск конденсора з конденсорными кільцями) в положення, відповідне вибраному об'єктиву. Для цього регулювальне колесо має спеціальні позначки 0-10-20-40-100. Система обертання клік-стоп (до клацання) дозволяє бути впевненим у правильній установці.
• Після цього в окулярний тубус визуализирующей насадки замість звичайного окуляра помістіть спеціальний юстировочный окуляр, також часто називають фазовим телескопом. Окуляр має фокусировочное кільце з насічками, обертаючи який можна домогтися сфокусованого чіткого зображення фазових кілець.
• З допомогою юстіровочних гвинтів кільцевої діафрагми конденсора слід домогтися концентричності фазових кілець об'єктива і конденсора. Повна концентричність не потрібно, але потрібно повне перекриття кілець: світле кільце конденсора повинно знаходитися всередині чорного кільця на об'єктиві.
• Дана процедура досягнення концентричності кілець повинна виконуватися для кожного об'єктива.

Звернемо увагу, що апертурна діафрагма конденсора для роботи методом позитивного фазового контрасту, як правило, широко відкрита.

В висновок залишається лише додати, що мікроскоп Bresser Science TRM-301 40x-1000x Phase Contrast дійсно є дуже гідним оптичним інструментом для лабораторії 21 століття, який дозволить Вам реалізувати різні методи мікроскопії, вживані в галузі біології і медицини.

Приклади зображень

Зразок - кров людини. Метод спостереження - світлого поля в прохідному світлі. Ліворуч зображення в об'єктив 40х, праворуч - в об'єктив 100х

Зразок - кров людини. Метод спостереження - фазово-контрастна мікроскопія. Зліва направо: зображення в об'єктив 20х, в об'єктив 40х, в об'єктив 100х

Автор огляду (текст і фото): Галина Цехмістро